细胞免疫荧光实验原理及其步骤（细胞免疫荧光实验注意事项）

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1免疫荧光的原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。

免疫荧光是利用抗原抗体反应原理，将抗原与抗体进行结合。

免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光。

2细胞免疫荧光,求助

取出细胞复温至室温约1h。冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床。配制荧光标记二抗：Ab50598 Goat anti-rabbit IgG(H&L) TRITC，用PBS或FBS配制。

细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

(3)抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。

首先你应该确认老鼠是不是转基因老鼠，会不会有自发荧光的产生。二抗就是荧光染料，只要加了二抗，就会有荧光的产生，所以需要在加完二抗后用PBS洗5次，充分将多余二抗洗掉，避免在拍片时产生躁点影响实验结果。

定量是可以的，要做western blot和ELISA，但也只是相对定量，不是绝对定量，把你检测的结果保存一张比较好的图片，背景清晰，结果稳定的。

3免疫荧光实验的步骤注意事项?

1、进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。

2、细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

3、操作步骤：细胞铺板：将细胞以合适的密度（注意：一般情况下，细胞密度不要太高，不要叠在一起，否则干扰最后拍片）接种于玻底培养皿（b小编用的是confocal皿：如下图）中，进行转染，加药诱导等实验处理。

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